设为首页|加入收藏

服务热线: 029-87888851

销售热线: 029-85562470

经典案例

ACQUITY UPLC-ELSD 测定奶粉和牛奶中八种糖的含量

赵淑军

(沃特世科技有限公司 北京实验室 中国)

关键词:超高效液相色谱 : 奶粉 牛奶 Fructose(果糖) Sorbose(山梨糖) Glucose(葡萄糖) Sucrose(蔗糖) Maltose(麦芽糖) Lactose(乳糖) Maltotriose(麦芽三糖) Maltotetraose(麦芽四糖)

实验方法

1、材料、试剂和仪器

乙腈为色谱纯,三乙胺为优级纯,实验用水为超纯水(18MΩ,TOC 3ppb),牛乳清蛋白标准品Bα-La 、Bβb-Lg和Bβa-Lg;ACQUITY UPLC?超高效液相色谱系统,Acquity ELSD检测器,FILTER MIXER (425μl,P/N 205000403)

2、色谱条件
液相系统:Waters ACQUITY UPLC?配ACQUITYELSD蒸发光检测器
色谱柱:ACQUITY UPLC BEH Amide 2.1mm x 100mm,1.7 ?m
柱温:35?C
分析时间 :18 min
进样量:5ul(样品进样2ul)
流动相:A:水 B:0.2%TEA乙腈溶液;梯度洗脱
弱洗溶剂:乙腈/水=90/10,800ul
强洗溶剂:乙腈/水=10/90,500ul
进样方式:不充满定量环(使用针溢出)
ELSD条件:
增益:500
数据率:10pps
喷雾器模式:冷却
漂移管温度:55℃
气体压力:30psi
实验室试验温度:20℃
实验室试验湿度:45%
工作电源:220V稳定电源
梯度方法见下表:

3、数据处理系统 、数据处理系统

Empower 2

4、前处理方法

称取 2.0 g 奶粉样品或 5ml 液态奶样品,加入 20mL(对于液态奶添加 15ml)1/1 的乙腈水溶液溶解,手摇震荡混匀,然后均质混匀 2 分钟,室温下 8000r/min 离心 15 分钟,取上清液过 0.2um 滤膜;对于某些样品由于糖含量很高,所以过滤后的样品可能需要用乙腈/水=70/30 的溶液稀释一定倍数后,进样检测。

结果与讨论

1、标准配制

八种糖标准分别称取10mg,用1/1的乙腈水定容1ml,然后用乙腈/水=70/30的溶液稀释配制各个浓度的标准品,进行实验。

2、八种糖 UPLC 分离检测色谱图及数据

图 1 八种糖 UPLC 分离检测色谱图

图1是八种糖50ppm混合标准品用UPLC(ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱)分离,ELSD检测的色谱图,按照保留时间顺序分别是:Fructose(果糖)、Sorbose(山梨糖)、Glucose(葡萄糖)、Sucrose(蔗糖)、Maltose(麦芽糖)、Lactose(乳糖)、Maltotriose(麦芽三糖)、Maltotetraose(麦芽四糖);包括5种单糖和3种多糖。有关数据见下表。

其中较难分离的 Fructose(果糖)和 Sorbose(山梨糖)、Maltose(麦芽糖)和 Lactose(乳糖)均分别达到 1.6、1.5 的分离度。

3、方法的检出限

如图 2 所示,为 5ppm 的混标色谱图,此浓度下按保留时间顺序八种糖的信噪比分别达到 3、5、5、24、6、12、5 和 3,(进样量 10ul):

 

可见,八种糖中Fructose(果糖)、Sorbose(山梨糖)、Glucose(葡萄糖)、Maltose(麦芽糖)、Maltotriose(麦芽三糖)和Maltotetraose(麦芽四糖)的检测限为5ppm;此浓度下Lactose(乳糖)可达到定量限,而Sucrose(蔗糖)的定量限可以到达2ppm。

4、方法的线性相关性 、方法的线性相关性

浓度分别为5.000、10.000、20.000、50.000、100.000、150.000 mg/L的八种糖标准品依次进样,进样量均为5?L,外标法定量。以峰面积A的lg值为纵坐标,浓度C的lg值为横坐标进行线性回归,得到8种糖的线性方程、复相关系数和线性曲线图如图3-图10所示,在5.000-150.000 mg/L范围8中糖均具有良好的lg-lg线性关系。

5、实际样品检测结果 、实际样品检测结果

从市场取某一奶粉样品,进行实际提取实验,进样检测,色谱图及结果数据见图11所示,可以看出此样品中含有蔗糖、乳糖、麦芽三糖和麦芽四糖四种糖成分,同时发现蔗糖和乳糖得含量相当高,已经超出检测器的响应范围;因此将此样品稀释 100 倍后再次进样检测,结果数据见图 12。


由图 11 和 12 的数据可以知道此奶粉中含有蔗糖 16.8mg/g、乳糖 140.1 mg/g、麦芽三糖和麦芽四糖的含量分别只有 1.9 mg/g、1.3 mg/g。某液态奶提取后,稀释 100 倍检测结果见图 13。

6、重现性

首先用 50ppm 混合标准 6 次连续重复进样,考察标准品在本方法下的稳定性,见图 14所示重叠色谱图,重复数据见表 3、表 4。

提取奶粉实际样品,由于乳糖含量较高,将其稀释了 100 倍,然后在不同天次连续 3天进样检测,考察本方法对于实际样品天间的重现性情况,如图 15 所示是该实际样品 3 天内 3 次进样的重叠色谱图,有图可见该方法对实际样品在天间具有较好的重现性。

结论:

本方法建立了用Waters UPLC-ELSD系统检测奶粉和牛奶实际样品中Fructose(果糖)、Sorbose(山梨糖)、Glucose(葡萄糖)、Sucrose(蔗糖)、Maltose(麦芽糖)、Lactose(乳糖)、Maltotriose(麦芽三糖)、Maltotetraose(麦芽四糖)8种常见糖的的定量分析方法。方法的检出限为有6种糖达到5μg/g,两外两种糖Sucrose和Lactose在5μg/g下的信噪比可达到24和12。使用ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱和三乙胺流动相体系,8种糖均实现基线分离,可以用于奶粉和牛奶中常见这8种糖的含量测定。
参考文献:

Waters ACQUITY UPLC BEH Amide Columns Care & Use,P/N:715001371